O
fragmento deve ser retirado de maneira a evitar-se que a pinça
deixe marcas permanentes no tecido. O instrumento usado (bisturi,
punch,etc...) deve estar afiado para não esmagar o fragmento,
produzindo artefatos de difícil correção durante o processamento.
Antes de ser colocado no fixador, é importante que o material
seja distendido sobre pequeno pedaço de papel de filtro ou
qualquer outro papel poroso (por exemplo, coador de café de
papel), desde que não contenha corantes que possam impregnar
o tecido.
O fragmento deve ser colocado imediatamente no fixador, nele podendo
permanecer por longo tempo.
O melhor
fixador é o formol a 10% tamponado, isto é, diluído
em tampão fosfato, com pH de aproximadamente 7,2 porque este
é o tampão mais encontrado nos fluidos orgânicos.
O uso do formol tamponado é desejável porque preserva
os tecidos, mantendo suas características bioquímicas,
permitindo a realização de colorações
de melhor qualidade e a obtenção de melhor resultado
nas reações imuno-histoquímicas.
O
formol a 10%, não tamponado, torna-se mais ácido com
o passar dos dias, comprometendo a qualidade de qualquer coloração
ou estudo imuno-histoquímico que se torne necessário.
O volume a ser utillizado deve ser 10 a 20 vezes o volume do espécime.
O tempo de fixação é de 1 a 2 horas para cada
milímetro de espessura de tecido.
No entanto, na impossibilidade da obtenção de formol
a 10% tamponado, deve-se continuar utilizando o formol a 10%, que
pode ser facilmente preparado:
Diluir UMA PARTE DE FORMOL BRUTO - formaldeído a 40%
-
(comprado em pequenos frascos de 30ml, nas farmácias)
em NOVE PARTES DE ÁGUA CORRENTE
(que podem ser medidas no mesmo frasco vazio do formol bruto).
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Exemplo:
Outros fixadores - A fixação com álcool etílico
deve ser feita apenas em casos especiais, pois torna o tecido muito
duro, dificultando a realização dos cortes histológicos.
ATENÇÃO:
É
necessária a utilização do álcool
etílico como fixador nas biopsias de pacientes com suspeita de gota,
pois preserva os cristais de urato que poderão ser
vistos ao microscópio de luz polarizada. A fixação
em formol a 10%, que é uma solução aquosa,
dissolve esses cristais.
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FIXAÇÃO
DE FRAGMENTOS DA PLACA UNGUEAL.
Fragmentos
da placa ungueal, sem necessidade de biópsia da matriz e/ou
leito ungueal, são muito úteis na demonstração
de hifas e esporos de fungos, esclarecendo suspeitas de onicomicose.
Nesses casos são realizados cortes histopatológicos
dos fragmentos da placa ungueal e corados em HE (Hematoxilina-eosina)
e PAS (ácido periódico-Schiff), com excelentes resultados.
